Bei einem Single Spectrum Scan werden der Anregungs-Monochromator oder der Emissions-Monochromator (oder auch beide simultan) über einen einstellbaren Wellenlängenbereich durchgefahren, während die Intensität des Fluoreszenz-Signals in Abhängigkeit von der Wellenlänge kontinuierlich gemessen und aufgezeichnet wird. Nehmen Sie zum Beispiel Spektren auf, um die optimalen Emissions- und Anregungswellenlängen zu bestimmen. Es stehen drei Arten von Scanmodi zur Verfügung: Excitation Scan, Emission Scan und Synchronous Scan.
Um einen stabilen Zustand in der Messzelle des Fluoreszenz-Detektors zu erreichen sollte während der Scans der Pumpenfluss angehalten oder auf eine sehr geringe Flussrate eingestellt werden. Wenn der Scan während der Elution eines Peaks abgeschlossen werden kann und der Scan wesentlich schneller als die zeitliche Halbwertsbreite des Peaks ist, kann der Pumpenfluss konstant gehalten werden. Weitere Informationen finden Sie in der Chromeleon-Hilfe.
Aufzeichnen eines Basislinienspektrums
Für alle Scan-Verfahren kann ein Basislinienspektrum mit den selben Parametern aufgenommen werden. Dieses wird in der Software Chromeleon gespeichert und automatisch von den anderen Spektren subtrahiert. Das Ergebnis ist ein Differenzspektrum, d.h. die Autofluoreszenz des verwendeten Lösungsmittels wird eliminiert. Beachten Sie, dass Chromeleon eine Warnung ausgibt, wenn das Basislinienspektrum fehlt.
Werden die Parameter für einen Scan geändert, wird das Basislinienspektrum automatisch gelöscht und muss neu aufgenommen werden. Sie können zudem jederzeit ein bestehendes Basislinienspektrum über den Befehl ClearBaseLine löschen.
Excitation Scan
Die Wellenlänge auf dem Emissions-Monochromator wird konstant gehalten, während der Anregungs-Monochromator einen Wellenlängenbereich scannt. Sie erhalten das Anregungsspektrum der Probe.
Emission Scan
Die Wellenlänge auf dem Anregungs-Monochromator wird konstant gehalten, während der Emissions-Monochromator einen Wellenlängenbereich scannt. Sie erhalten das Emissionsspektrum der Probe.
Synchronous Scan
Ein festgelegter Bereich der Anregungswellenlänge wird gescannt, während synchron dazu mit einem benutzerdefinierten Offset die Emissionswellenlänge gescannt wird. Dies ermöglicht Ihnen, ein geeignetes Wellenlängenpaar für erste Experimente zu bestimmen. Die optimalen Anregungs- und Emissionswellenlängen können jedoch nur mit separaten Excitation- und Emission-Scans ermittelt werden.
So führen Sie einen Single Spectrum Scan durch
Informationen zu Spektrenscans und Beispiele für Instrumentenmethoden finden Sie in der Chromeleon-Hilfe.
VORSICHT