Certaines anomalies du signal mesuré pour un échantillon peuvent être corrigées en mesurant un signal de référence, défini par la largeur de bande de référence et la longueur d’onde de référence des paramètres.
Longueur d’onde de référence
Il est possible que des substances interférentes, c’est-à-dire des substances autres que l’analyte, contribuent à l’absorption de l’échantillon. L’absorption par ces substances interférentes s’ajoute au signal mesuré pour l’analyte. Par conséquent, cela peut provoquer des erreurs de mesure de la concentration en analyte. L’absorption par des substances interférentes est souvent due à une absorption variable de l’éluant ou à l’impact de l’indice de réfraction. L’indice de réfraction peut avoir une influence, notamment en cas de séparation à l’aide de gradients.
Si la substance interférente absorbe sur une plage spectrale étendue, l’impact de l’absorption interférente sur le signal mesuré peut être réduit de manière mathématique. C’est pour cette raison que l’absorption est mesurée aussi bien pour la longueur d’onde de mesure que pour une longueur d’onde de référence. Pour corriger le signal, l’absorbance mesurée au niveau de la longueur d’onde de référence est soustraite de l’absorption à la longueur d’onde de mesure.
NOTE
L’utilisation d’une longueur d’onde de référence peut provoquer une interférence supplémentaire dans le chromatogramme.
Vous pouvez définir la longueur d’onde de référence distinctement pour chaque canal de signal et pour le champ 3D (disponible uniquement sur les détecteurs VC-D11 et VF-D11).
Consignes
Pour réduire efficacement l’interférence, sélectionnez la longueur d’onde de référence de telle sorte qu’elle remplisse les critères suivants :
L’absorption de la substance interférente est quasiment la même pour la longueur d’onde de mesure et pour la longueur d’onde de référence.
Si la hauteur d’absorption de la substance interférente à la longueur d’onde de mesure diffère de celle à la longueur d’onde de référence, l’interférence est compensée soit de manière insuffisante, soit de manière excessive.
L’échantillon n’absorbe pas à la longueur d’onde de référence.
Si l’échantillon absorbe également dans la plage spectrale de la longueur d’onde de référence, la surface de pic et la hauteur de pic mesurées sont réduites.
Aucune autre substance, telle que les composants coélués de l’échantillon, n’absorbe à la longueur d’onde de référence.
L’absorption de substances supplémentaires à la longueur d’onde de référence peut entraîner des pics négatifs dans le canal de signal.
Largeur de bande de référence
Si la longueur d’onde de référence est utilisée, la largeur de bande de référence détermine combien de signaux de photodiodes sont inclus dans le calcul de la moyenne pour la mesure de référence. Vous pouvez définir la largeur de bande de référence distinctement pour chaque canal de signal et pour le champ 3D (disponible uniquement pour les détecteurs VC-D11 et VF-D11).
Sélectionnez une largeur de bande de référence aussi étendue que possible, par exemple comprise entre 30 nm et 100 nm. Elle doit aussi être suffisamment étroite pour qu’aucun analyte n’absorbe dans la plage de référence.
N° | Description |
---|---|
A | Absorption relative |
B | Longueur d’onde en nm |
C | Plage de référence appropriée Dans cet exemple, la longueur d’onde de référence est réglée sur 350 nm et la largeur de bande de référence sur 100 nm. |