Un filtre en verre à l’oxyde d’holmium permet de valider l’exactitude des longueurs d’onde. Il est possible de placer le filtre dans le trajet lumineux devant la fente d’entrée afin de valider les longueurs d’onde. Le détecteur détermine les longueurs d’onde de plusieurs pics d’absorption dans le spectre résultant et les compare aux valeurs nominales d’oxyde d’holmium enregistrées dans le microprogramme du détecteur.
Il est possible de valider toutes les configurations de lampe (les deux lampes allumées, seule la lampe à UV allumée et — mais la moins favorable — seule la lampe à VIS allumée, si disponible).
L’exactitude est contrôlée pour les longueurs d’onde mentionnées dans la déclaration de conformité du filtre en verre à l’oxyde d’holmium. Pour obtenir des renseignements complémentaires sur cette déclaration, reportez-vous à la section Conformité aux normes NIST.
Il est également possible de réaliser une validation des longueurs d’onde à l’aide d’un étalon externe, telle qu’une solution de pyrène. Dans ce cas-là, une exactitude de ± 1 nm peut être obtenue.
À quel moment exécuter cette opération ?
Une validation des longueurs d’onde est recommandée dans les situations suivantes :
Après le déplacement du détecteur
Après le remplacement de la cellule à écoulement
Après le remplacement d’une lampe
Préparatifs
Avant de commencer la validation ou l’étalonnage des longueurs d’onde, respectez les consignes suivantes :
Laissez la cellule à écoulement se réchauffer pendant 5 minutes.
Assurez-vous que la ligne de base est suffisamment stable. Une instabilité de la ligne de base peut par exemple être observée si la composition du solvant a été modifiée ou si des bulles d’air sont présentes dans le trajet lumineux.
Veillez à ce que le solvant qui passe à travers la cellule à écoulement n’ait pas une absorption élevée pour la plage de longueurs d’onde du filtre en verre en oxyde d’holmium qui doit être vérifiée.
Ce problème peut notamment survenir si la cellule à écoulement contient un mélange comportant 96 % d’hexane et 4 % d’acétate d’éthyle. Thermo Fisher Scientific recommande d’utiliser de l’eau dégazée de qualité LC/MS.
Laissez les lampes se réchauffer et atteindre la température de fonctionnement. Les lampes doivent être allumées depuis au moins 1 heure avant que vous ne débutiez la validation ou l’étalonnage des longueurs d’onde. Le spectre d’une lampe change considérablement au cours des premières minutes suivant l’allumage de la lampe.
Pour réaliser une validation des longueurs d’onde
Démarrez la pompe au débit qui sera utilisé pour l’analyse.
Sur le système de données de chromatographie, dans la fenêtre Commands (Commandes), exécutez la commande WavelengthValidation (ValidationLongueurdonde).
Vérifiez que la validation des longueurs d’onde a réussi. En cas d’échec, effectuez un étalonnage des longueurs d’onde (reportez-vous à la section suivante).
Pour réaliser un étalonnage des longueurs d’onde
Vérifiez que la lampe à UV est sous tension.
Durant l’étalonnage des longueurs d’onde, la lampe à UV doit absolument être allumée, mais l’allumage de la lampe à VIS est facultatif.
Sur le système de données de chromatographie, dans la fenêtre Commands (Commandes), exécutez la commande WavelengthCalibration (ÉtalonnageLongueurdonde).
Répétez la validation des longueurs d’onde telle que décrite ci-dessus.